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    EPC細胞免疫熒光實驗報告
    更新時間:2019-12-11   點擊次數:2838次

    一、 實驗儀器與試劑

    表格一:實驗儀器

    儀器

    廠家

    型號

    細胞培養箱

    Thermo Scientific

    HERA cell CO2

     激光共聚焦顯微鏡

    Leica

    TCS SP5

    表格二:試劑

    試劑

    廠家

    細胞培養基

    Gibco

    PBS (0.1 M, pH 7.4)

    自配

    4 %多聚甲醛溶液

    索來寶

    BSA

    Sigma

    Triton-x-100

    生工生物

    FITC 標記羊抗兔熒光二抗

    Santa Cruz

    DAPI

    碧云天

    二、 實驗步驟

    制作細胞爬片,根據實驗方案進行加樣操作;

    反應 24h 后,棄原有培養液, PBS 洗 1 次;

    4%的多聚甲醛 4 度固定 15 分鐘,PBS 洗 2 次,5 分鐘/次;

    4. 加入 0.1%的 Triton-x-100,室溫孵育 15 分鐘;

    5. PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;

    6. 10%BSA 封閉 30 分鐘;

    加入一抗 50μL(稀釋度為 1:100),4℃過夜孵育;

    第二天復溫 30min,PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;

    每組分別加入 FITC 標記羊抗兔熒光二抗 50μL(稀釋度為 1:500),37℃培養 30 分鐘;

    PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;

    11. DAPI 染色 5 分鐘;

    PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;

    在激光共聚焦顯微鏡上觀察(使用 405nm 和 488nm 的激發光源進行熒光檢測)。  

    三、 實驗結果

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