ZETA LIFE細胞增殖及毒性檢測-CCK試劑盒

品牌：ZETA LIFE .

貨號：K009

產地：USA

英文名:cck8

保質期:24 months

保存條件:4°C避光保存

規格:500T-3000T

ZETA LIFE細胞增殖及毒性檢測-CCK試劑盒

CellCounting Kit簡稱CCK試劑盒，是一種基于WST (水溶性四唑鹽，化學名: 2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯基) -5-(2,4-二磺基苯) -2H四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

CCK是MTT的一種升級替代產品，和MTT或其他MTT類似產品如XTT. MTS等相比有明顯的優點:

-CCK被線粒體內的脫氫酶還原成的formazan是水溶性,不需要有特定的溶解液來溶解，而WST和XTT、MTS產生的formazan都不是水溶性的，因而可以省去后續溶解步驟。

-CCK比XTT和MTS更加穩定，使實驗結果更加穩定。

-CCK和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

CCK法與其他檢測方法之間的比較：

操作說明:

一、制作標準曲線(測定細胞具體數 量時)

1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。

2、按比例(例如: 1/2比例)依次用培養基等比稀釋成-一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度， 每組3-6個復孔。

3、接種后培養2- 4小時使細胞貼壁,然后加CCK試劑培養-定時間后測定OD值， 制作出一條以細胞數量為橫坐標(X軸),

OD值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一

致，便于確定細胞的接種數量以及加入CCK后的培養時間)。

二、 細胞活性檢測

1、在96孔板中接種細胞懸液(100ul孔)。將培養板放在培養箱中預培養(在379C, 5% CO2的條件下)。

2、向每孔加入110ul的CCK 溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數)。

3、將培養板在培養箱內孵育14小時。

4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

5、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮蓋培養

板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

三、細胞增值~毒性檢測

1、在96孔板中配置100u的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(在379C，5% CO2的條件下)。

2、向培養板加入10ul不同濃度的待測物質。

3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如: 6、 12、24或48小時)。

4、想每孔加入10ul CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數)。

5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

7、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養基(除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基)，去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

備往:

①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK試劑后的培養時間。

②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入

CCK試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基頁面下加，容易產生氣泡，會干擾OD值讀數。

③白細胞可能需要培養較長時間。

④當使用標準96孔板時，貼壁細胞的小接種量至少為1 ,000個/孔L(100u培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此

推薦接種量不低于2500個/F孔(100ul培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK溶液。

⑤如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片,但是450nm濾光片的檢測靈敏度較高。

⑥培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

動計算:

細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]x100

A(加藥):具有細胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培養基和CCK溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A(0加藥):具有細胞、CCK溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力

保存條件:

49C避光保存，有效期一年。

溫聲提示:不可用于臨床治療。