透射電鏡觀察細胞樣品實驗檢測 

一、 實驗儀器與試劑

表格一：實驗儀器

表格二：試劑

二、 實驗步驟

1.  醛類固定：加入1mL 2.5%戊二醛溶液（PBS 稀釋），4度固定過夜；

2．清洗：用PBS清洗4次，每次靜置15min；

3．固定：用1%溶液 4度固定2h；

4．清洗：用PBS清洗4次，每次靜置15 min；

5．脫水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脫水各靜置15min(在70%乙醇中靜置過夜)，再用100%乙醇脫水2次，每次靜置20min；

6．置換：用丙酮置換2次，每次靜置15min；

7.  浸漬：過程如下：

A．丙酮：包埋劑=2：1（體積比）的浸漬液中浸漬1h；

B．丙酮：包埋劑=1：2（體積比）的浸漬液中浸漬4h；

C．純包埋劑浸漬2次, 每次24h；

8． 包埋：將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中；

10．聚合：將包埋板置于65℃條件下各聚合48h以上；
11．修塊：將包埋頭修成梯形，且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm；

12．超薄切片：切片厚度70nm；

13．染色：醋酸雙氧鈾染色 10min后清洗；

          醋酸鉛染色 10min后清洗；

14. 上機檢測。

透射電鏡制備注意事項(細胞)

1、細胞數量: > 1*10的6次方;

2、消化細胞時要注意不要過度，及時用含血清的培養液終止消化;

3、終止消化后，預冷的PBS (pH 7.4 )洗細胞1-2次離心(1500rpm, 5min)棄上清(細胞收集在1.5ml的EP管中) ;

4、加入1mL 2.5%戊二醛溶液(需用PBS配制該溶液)，可用吸管輕輕吹散細胞，使細胞懸浮于固定液中;

5、4度固定過夜后寄出 (寄送時加冰袋，并用2.5%戊二醛溶液將EP管中剩余空間充滿)。

腎臟組織樣本制備步驟：

1、迅速取材；2、PBS漂洗2次，切成小塊（米粒大小）；3、快速放入2.5%戊二醛固定液中，4度固定過夜；4、固定液將整個容器里面的空間都充滿，封口膜封口；5、多加冰袋運輸。

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