昆蟲細胞培養基CW003使用介紹參考

產品描述

CW003培養基適用于sf9、High Five等昆蟲細胞懸浮培養和瞬時表達，含有細胞生長的全

部營養成分，無需添加物即可使用。

產品特點

? 產品不含血清

? 即用型培養基，無需添加額外成分

? 支持sf9、High Five等昆蟲細胞的懸浮培養馴化與高密度培養

? 支持桿狀病毒載體表達系統生產重組基因蛋白

基礎參數

產品使用方法

細胞馴化與傳代

1） 培養條件

溫度：27oC；推薦搖床轉速：110-130 rpm；傳代細胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL。

2） 直接馴化

大部分情況下，培養于其他培養基中的sf9、High Five細胞，可以直接適應至CW003培養

基，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養基即可。

3） 漸進式馴化

注意：選用低代次、處于對數的細胞進行馴化。

①在原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代2到3次至細胞生長穩定，使用原培養基

+CW003培養基（CW003比例從25%至90%）逐漸馴化，傳代細胞密度控制在0.8-1.1×106

cells/mL，每48h進行傳代。

②待細胞在含90%以上CW003培養基生長正常后，可嘗試將細胞傳代至100% CW003培養基

中，并連續傳代3-4次，如細胞保持穩定生長，即已適應至CW003培養基。

細胞復蘇

1） 迅速取出凍存的細胞，在37℃水浴條件下進行快速解凍（可以在水中輕輕晃動，時間控制

在120s以內），至凍存管內剩余小塊冰晶。

2） 在生物安全柜中，將融化的細胞全部轉移至無菌離心管中，加入10 mL預熱至37℃的培養

基，離心換液（175 g，5 min）去除全部上清，加入20-30mL預熱至37℃新鮮培養基重懸，后

轉移至搖瓶培養。

細胞凍存

1） 凍存細胞時，要選擇處于對數、狀態良好，活力≥98%的的細胞；

2） 事先計算好凍存的細胞管數和所用的培養基的體積，凍存密度為2.5-3.5×107 （通常凍存

濃度為1.0-2.0×107）cells/ml/支；

3） 細胞凍存液配制：

45%新鮮培養基+45%原培養基（上清）+10%DMSO，充分混勻，存放于4℃，一般為當

天用當天制備；

4） 以175 g，5 min的條件離心收集細胞，棄上清，用凍存培養基（

4℃ ）重懸細胞；

5） 將重懸的細胞液迅速分裝細胞到無菌的凍存管中，每支1ml，并貼好標簽；

6） 將細胞凍存管放到程序降溫凍存盒（注意填充異丙醇，4℃預冷）中，置于-80℃ 冰箱(每

分鐘下降1℃)，過夜存放后將細胞轉入液氮罐中進行保存。