真假胎牛血清及擇取胎牛血清質量區別

　　近日，實驗室的細胞培養人員抱怨培養瓶中在顯微鏡的觀察下有若干“小蠕蟲”爬動，創凌生物提示您，這是黑膠蟲，可以說，這樣的細胞培養瓶可以說廢棄了，連二次實驗的價值都沒，話說黑膠蟲難道是實驗室的操作不當，如添加細胞因子，小分子化合物等中出現了人為的環境污染？不是的，黑膠蟲產生的致命原因是假的胎牛血清導致！

　　據病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內的一種原蟲，似乎和草履蟲和變形蟲有類似之處，然而由于課題經費不夠而不能繼續進行下去。

　　在細胞培養的時候，有時會在400倍顯微鏡下看到小黑點在動，小黑點有時呈點狀，有時呈小的片狀，運動形式為在原地振動（類似布朗運動），這種小黑點既不是細菌、霉菌，也不是支原體（我們曾經請周守長用血平板培養過，沒有菌落出現），目前業內人士稱其為“黑膠蟲”。

　　國內的血清中，通常滅活之后都會有絮狀沉淀出現，而黑膠蟲出現時，所使用的血清被反復凍融過多次。所以推測，所謂的“黑膠蟲”其實就是血清中的某些蛋白成分的物質，經過滅活之后喪失活性，在培養基中，鏡檢見到的運動其實是這些物質在溶液中做“布朗運動”。隨著細胞消耗培養基，這些物質越來越多，*后細胞所用的營養消耗完，細胞容易死亡。

　　市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養的人，難以分辨血清質量的優劣，假的胎牛血清，導致黑膠蟲的現象越明顯，總結如下：

　　一、外觀

　　拿到血清，*先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養經驗的人來說，外觀的判斷尤為重要

　　1、顏色

　　根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，我國的細胞培養用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度，良好的操作能降低血清的溶血。

　　國產血清的采血點很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會有溶血，表現出明亮的蠟黃色，當然，國產血清也很少有標準意義上的胎牛血清。

　　進口胎牛血清或多或少總有點溶血，因為真正的胎牛血清凝血功能差，紅細胞容易破裂。

　　總的來說，國產的血清呈現出蠟黃。進口的血清，質量的呈現出談黃、微紅色，如Gibco 16000，差點的呈現出橘紅色或鮮紅色。當然，熱滅活血清或保存不當的血清，由于血紅蛋白的破壞氧化，會呈現出暗紅，甚至咖啡色。

　　2、沉淀

　　很多血清客戶，會發現進口血清有沉淀，從而懷疑血清的質量問題，這是沒有根據的。

　　血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生，對血清質量沒有任何影響，沉淀的產生原因很多，和廠家的加工生產方式密切相關。

　　國產的血清，大多來自北方，由于價格低廉，保存環境都不好，從采血、冷凍、運輸到生產會經過多次凍融，每次凍融過程，就會析出部分纖維蛋白沉淀，這樣，血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”，很少有沉淀產生。

　　進口的胎牛血清，過濾分裝前很少會反復凍融，生產后的成品也是清澈的，但隨著時間的推移，血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然，進口的新生牛血清，一般牛齡都在2周左右，血清中的各種蛋白含量明顯偏高，生產后血清可能會渾濁，甚至有大量沉淀。

　　當然，購買回來的血清都是冰凍狀態，使用時需要融化，融化過程在溫度較低的狀態下慢慢進行，否則沉淀相對較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質量，但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。

　　3、澄清度

　　進口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低，表現為稀薄、清淡，而國產血清，因為絕大多數是新生牛血清，相對而言更加粘稠，顏色略深，這對于初步接觸血清的人很難判斷，但把兩者進行對比，可容易分辨。

　　二、主要技術指標

　　目前國內血清的質量標準是2005版的《中華人民共和國藥典》，主要指標有以下幾點：

　　1、內毒素

　　標準為不高于5EU/ml。內毒素是細菌破碎后細胞壁的成分，因此內毒素含量的高低可表現出采血到生產一系列過程中的無菌操作情況。目前，國產血清基本都能達到這一要求，很多進口胎牛血清內毒素含量反而更高，如Gibco 26140，只要求不高于50EU/ml，高出我國標準10倍，即使是16000，也要10EU/ml，血清質量也未見影響。可見，內毒素含量偏高不影響質量，除非含量*，預示著已經污染。

　　2、總蛋白含量

　　胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數值偏高，說明采血的牛齡偏大，不是胎牛，數值偏低，表明血清可能摻水了。

　　3、血紅蛋白

　　標準為不高于20mg/dl，顏色越紅，數值越高，反之，數值越低。

　　4、pH

　　國產血清，大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關，這也能用來初步鑒別血清的來源。

　　5、微生物

　　包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等。隨著國內血清廠家生產條件的改善提高，細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經過0.1um過濾，大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的，主要是生產環境過程中帶入，又無法過濾，很難*清除，但對血清質量影響不大。病原性病毒，特別是BVDV，在國產血清中幾乎90%以上都存在，這類微生物是影響國產血清質量的重要因素，而進口胎牛血清中基本都控制的很好。

　　6、免疫球蛋白

　　國產血清的只是定性檢測，結果也很不準確，進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數值能*體現出采血的時的牛齡情況，國產血清，基本都是新生牛的，血清中容易產生IgM，IgG的含量也偏高，進口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也較低。

　　7、其它

　　不管是國產還是進口血清，都是不測抗生素的（無四環素胎牛血清除外）。國外，抗生素的使用很嚴格，用量也很少，每頭奶牛的產品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低；國內，抗生素的濫用已成了普遍現象，血清中殘留很高，對細胞培養極為不利，這是國產血清質量差的根本原因。

　　三、血源

　　市場上的血清血源主要分為中國、北美、南美和澳洲。

　　1、國產血清質量差，這是*的，主要原因并不是生產廠家的責任，而是天然環境差和抗生素的大量使用。國內環境污染嚴重，同時飼養過程中抗生素極其濫用，有毒有害物質會大量殘留在血清中，*終不利于細胞的生長。

　　2、南美血清，來源很多，如Bioind的以色列巴拿馬(04-001-1A/B，04-121-1A/B，04-001AUS-1A/B，04-002-1A/B，04-222-1A/B，04-011-1A/B，04-201-1A/B，04-400-1A/B) 、Gibco的烏拉圭、巴西等，這些血清由于采血的不可控性，質量參差不齊，當然，相對于國內血清來說好的多。另外，國內銷售的南美血清大多顏色鮮紅，如Bioind、Gibco、Hylone等品牌，但阿根廷的血清例外，這可能和各國的采血、生產工藝有關。

　　3、北美血清，主要來自美國和加拿大，如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類血清，等級越高的顏色越淡，表現為淡黃中帶一點微紅，SH30070和SH30396對比就很明顯，特級胎牛血清基本就能進行干細胞培養。北美血清還有一個顯著特點就是每瓶血清都能溯源，這對一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。

　　4、澳洲血清，來源主要是新西蘭和澳大利亞，這是在北美血清禁運之后進入中國市場的，一般不具有溯源功能，由于生產、運輸等原因，價格相對來說比較貴。拿Gibco的10099和16000相比較，后者質量等級更高，顏色更淡，性價比更高。