本試劑盒針對哺乳動物細(xì)胞、組織開發(fā)的專用裂解液DC，在10 分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織的裂解、提
取和純化。使用高效硅基DNA 純化柱，高效結(jié)合基因組DNA，從而獲得純度高，產(chǎn)量高的基因組
DNA。提取的基因組DNA 完整性高，適合PCR、qPCR、酶切、Southern 雜交、文庫構(gòu)建、克隆等。
本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。
試劑盒組成
保存條件
室溫保存一年。
自備材料
無水乙醇、無DNase 和無RNase 離心管、RNaseA（10mg/mL，或貨號QR0101）
使用方法
1. 樣本處理
1.1 從動物組織中提取DNA
1.1.1 取20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨，加入700μL 裂解液DC，充分混勻，室溫作用1 分鐘。
或取20-100mg 樣本加入700μL 裂解液DC，加入1 顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2 分鐘。
1.1.2 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10 分鐘。
1.1.3 加入350μL 無水乙醇，充分混勻，12,000rpm 離心1 分鐘。
1.1.4 取700μL 上清加到DNA 純化柱中，按照步驟2.1-2.7 操作。
1.2 從懸浮細(xì)胞中提取DNA
1.2.1 細(xì)胞1,000rpm 離心5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。
1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106 個時，加入500μL 裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107 個時，加入700μL 裂
解液DC。輕輕吹打混勻，室溫放置1 分鐘。
1.2.3 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10 分鐘。
1.2.4 加入0.5 倍體積的無水乙醇，上下顛倒混勻。
1.2.5 取700μL 加入DNA 吸附柱中，按照步驟2.1-2.7 操作。
1.3 從貼壁細(xì)胞中提取DNA
1.3.1 胰酶消化細(xì)胞后1,000rpm 離心5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。
1.3.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106 個時，加入500μL 裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107 個時，加入700μL 裂
解液C。輕輕吹打混勻，室溫放置1 分鐘。
1.3.3 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10 分鐘。
1.3.4 加入0.5 倍體積的無水乙醇，上下顛倒混勻。
1.3.5 取700μL 加入DNA 吸附柱中，按照步驟2.1-2.7 操作。
2. DNA 純化
2.1 12,000rpm 離心30 秒，倒掉收集管中廢液。
2.2 向吸附柱中加入500μL 洗滌液DCW1，12,000rpm 離心1 分鐘，倒掉收集管中廢液。
2.3 向吸附柱中加入500μL 洗滌液DCW2，12,000rpm 離心30 秒，倒掉收集管中廢液。
2.4 重復(fù)步驟2.3 一次。
2.5 12,000rpm 離心2 分鐘，倒掉收集管中廢液。
2.6 將吸附柱放入新無DNase 和無RNase 離心管，加入30-50μL 洗脫液C，室溫放置1 分鐘。
2.7 12,000rpm 離心2 分鐘，得到DNA 溶液，-80℃保存。
注意事項(xiàng)
1. 經(jīng)常更換手套，防止DNA 污染。
2. 使用無DNase 無RNase 的吸頭和離心管，防止DNA 降解。
3. 常更換吸頭，防止交叉污染。
4. 動作輕柔，防止基因組DNA 斷裂。
5. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液C 置于65℃水浴后再使用。
